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淋巴细胞分离液使用说明

更新时间:2011-03-09      浏览次数:990
使用说明
    1.在离心管中加入适量淋巴细胞分离液。
  2.取抗凝血与等量Hank’s液或平衡盐溶液充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持两液面界面清晰,水平离心2000rpm×20分钟。
  3.离心后,管内液体分为三层,上层为血浆和Hank’s液,下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液,在中上层液面处有一白色云雾层狭窄带,即为富含淋巴细胞和单核细胞的单个核细胞(PBMC)及血小板。
    4.吸去zui上层的血浆,收集血浆层和淋巴细胞分离液交界面的单个核细胞,尽量全部吸出PBMC,移入一新的离心管中;
    5.加入Hanks’液或无血清培养液,混匀后离心200×g 10分钟,弃去上清液(低速离心有利于去除细胞悬液中留存的血小板)。
    6.再用同样洗涤液洗涤细胞2次,每次离心500×g 10分钟,以洗去残留的淋巴细胞分离液。再用细胞分离液将细胞调配成适当浓度。通常,每毫升外周血可得1~2×106PBMC