石蜡及冰冻切片的制备（转）

备注：本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验

◆ 标本收集
    对于石蜡包埋的组织，活检或手术切除标本应在2小时内取材或固定，避免组织自溶及抗原变性等影响免疫组化结果。对于冰冻切片的组织，取材后应立即放入液氮冷冻，然后放入-80℃保存。取材时应保持所检标本原有的结构、形态，为避免挤压组织，尽量使用锋利刀片，并且避开坏死组织，除取病灶或含待检抗原部位外，还应取病灶与正常交界处，即所取组织切片中同时应有抗原阳性和阴性区，以形成自身对照。

◆ 常用固定液
    1．单纯固定液
    ● 4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。
    --甲醛（40%）  100 ml
    --无水磷酸氢二钠  6.5 g
    --磷酸二氢钠  4.0g
    --蒸馏水 900 ml
    ● 乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
    ● 4％的多聚甲醛：主要用于培养细胞的固定，动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2～24小时）也常选该固定液固定。

    2．混合固定液
    ● 乙醇一甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
    --甲醛（40％）  100 ml
    --95％乙醇  900 ml
    ● B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。
    --无水醋酸钠  1.25 g
    --升汞 6.0 g
    --蒸馏水 90 ml
    --使用前加入甲醛 10 ml
    ● Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
    --饱和苦味酸水溶液（约1.22%） 75 ml
    --甲醛 25 ml
    --冰醋酸 5 ml
    ● Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
    --无水乙醇 60 ml
    --氯仿 30 ml
    --冰醋酸 10 ml
    ● Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。
    --升汞 5.0 g
    --重铬酸钾 2.5 g
    --硫酸钠 1.0g
    --蒸馏水（加至） 100 ml

◆ 蜡块制备
    ● 固定（对于石蜡包埋的组织，一般用4％的多聚甲醛固定液。对于冰冻组织，一般采用冰冻丙酮，但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液，应根据具体情况而定）；
    ● 脱水浸蜡（75％乙醇90～120min，85％乙醇90min，95％乙醇Ⅰ40min，95％乙醇Ⅱ40min，，无水乙醇Ⅰ30min，无水乙醇Ⅱ30min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各15min（可视观察结果而定），石蜡Ⅰ60min，石蜡Ⅱ60min）；
    ● 包埋（铁板架包埋或其他容器，有时要求快速冷却。）

◆ 石蜡切片
    连续切片，切片厚2～4μm，按序贴在玻片的下1/3。52～60℃烤片18h。切片可在4℃保存数年（石蜡切片）。

◆ 冰冻切片
    将术中送检组织取材后，置于恒冷箱冰冻切片机切片架上，待组织块冷冻变硬后切片，厚度为3～7μm。将切片贴附在载玻片上，空气中稍风干（1～2min），后放入固定液中固定。