淋巴细胞分离液操作步骤是哪些？-上海易佰聚经贸有限公司

更新时间：2021-10-31 1718

　　淋巴细胞分离液是一种用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细胞的密度差异，通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。淋巴细胞分离液操作步骤是哪些？

　　使用操作步骤：

　　(1)取新鲜抗凝全血或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。

　　(2)在离心管中加入适量分离液，将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。

　　(3)室温，水平转子500~1000g，离心20~30min。

　　(4)离心后将出现明显的分层：上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。

　　(5)小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中，10mLPBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g，离心10min。

　　(6)弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。

　　(7)重复步骤6；

　　(8)弃上清，细胞重悬备用。

　　淋巴细胞分离液的原理：

　　外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同.淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075∽1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。

　　基本应用：

　　可用于体外分离外周淋巴血细胞，也可以从其他来源中分离单核细胞，包括脐带血细胞和骨髓细胞，适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞，在医疗和医学生物中广泛应用。其他人及动物多种比重细胞分离液。