超滤离心管/超滤管选购

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赛多利斯的Vivaspin 和Millipore的Amicon-Ultra超滤离心管大部分有现货的！！！

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用赛多利斯的Vivaspin 和Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号 的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方 法和注意事项。
  1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，zui常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、 5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。
  2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量*过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
  3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至zui低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开 离心机，否则离心机出问题时，无法*时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速 开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
  4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要判断是否漏管，用5mgml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为 止。
  5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再 浓缩至1ml左右，连续三次，zui后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍 左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。
  6、取出zui终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取 浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的zui后一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。zui后加入MilliQ水到超滤管中，没过 超滤膜，防止膜失水变干。
  7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。
  8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将 管芯浸入MilliQ水的烧杯（1或2L）中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用 MilliQ水洗干净。
  9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。
 

其中赛多利斯有以下系列：

超滤系列产品

赛多利斯提供三种材质的超滤膜可供客户选择：

聚醚砜（PES）膜：常规超滤膜，具有亲水性，高流速的特点。尤其适合回收大分子截留物；

三醋酸纤维素（CTA）膜：亲水性强，非特异性吸附极低，适合需要回收滤过液的操作；

Hydrosart®：具有极低蛋白吸附性的同时，又具有高流速的特点，是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想选择。

一、超滤离心管

订购信息：

注：以上货号为PES膜，另Vivaspin 2有CTA和Hydrosart®膜产品，Vivaspin 15R为Hydrosart®膜，欢迎垂询！

二、Vivacon®系列---- DNA、蛋白样品的浓缩和脱盐

特点：

---适合DNA和蛋白样品浓缩及更换缓冲液，非常适合稀释的样品

---水平模设计，配有再生纤维素超滤膜Hydrosart®

---样品处理后，可反转离心，保证*浓缩回收

三、Vivaflow 50/200回旋流/切向流超滤器

特点：

---超滤速度快，操作简单，价格经济

    ---全透明外壳，可随时观察到溶液超滤情况，残留体积及滤膜状况

    ---接头可连接多块超滤器，增加处理量，容易规模放大

Vivaflow 50性能

---处理量从100ml到5L甚至更大

---单个滤器有效膜面积50 cm²

---将500ml样品浓缩至15ml以下，只需不到50min.

---zui小循环体积小于10ml，样品可达到zui大限度浓缩

---残留体积小于500ul

---抛弃型滤器

Vivaflow 200性能

---处理量从0.5L到5L甚至更大

------单个滤器有效膜面积200 cm²

---将250ml样品浓缩至20ml以下，只需数分钟，将1L样品浓缩50倍，只需30分钟，两个超滤器并联使用可以在75分钟内浓缩5L样品

---zui小循环体积小于20ml，样品可达到zui大限度浓缩

---残留体积小于2ml

---可重复使用

订购信息

注：以上货号为PES膜，另Vivaflow 200有RC膜和Hydrosart®膜产品，Vivaflow 50有RC膜产品，欢迎垂询！