--组织单细胞悬液的制备方法

组织单细胞悬液的制备

（全过程及所需试剂要求无菌环境）

订货咨询：；；；

在线：1085201427  865512910    1730443944 

备注：本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验

剪碎法：

将组织块放入平皿后，加入少量PBS+10%胎牛血清；用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入10 ml PBS+10%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用100 目不锈钢滤网过滤到试管内；离心沉淀1500 rpm×3 min，再用PBS+10%胎牛血清洗3 次，每次以500 rpm 短时低速离心除去细胞碎片，以200 目不锈钢滤网过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）×107 /ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用胎牛血清悬起细胞浓度为1×107/ml 的单细胞悬液备用。

匀浆器法：

用眼科剪将组织剪成小块；放入70 ml 组织研磨器内，加入2 ml PBS+10%胎牛血清；缓慢转动研棒，研磨至匀浆；用10 ml PBS+10%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液，经200 目不锈钢滤网过滤；离心沉淀800 prm×2 min ，再用PBS 洗3 次，离心沉淀。以下处理同剪碎法。

细胞计数方法：

细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。

计数与计算过程：

1）、在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。

2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。

3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。

4）、按下式计数细胞悬液的密度：细胞密度＝（4 个大格细胞总数/4）×104 个/ml ×稀释倍数公式中乘以104 因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3

细胞计数要点：

1.进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104 个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到2 个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200 个/10mm2 或>500 个/10 mm2时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。

2.要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。

3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确；

4. 数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不计右线。

5. 操作时，注意盖玻片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。

初学者易犯的错误：

1. 计数前未将待测悬液吹打均匀。

2. 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。

3. 滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。

佰易聚生物商城提供的分子生物学试剂和试剂盒、美国联合碳化和美国光谱医学透析袋、培养基和培养耗材、细胞因子和细胞分离液、抗体和elisa试剂盒及常用生物试剂等,大量现货火爆*,欢迎登录www.ebioeasy.com或者，，洽谈选购！