NK细胞分离试剂盒操作说明

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各种动物外周血和脏器组织NK细胞分离试剂盒操作说明：

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试剂盒内容

试剂：全血及组织匀浆稀释液 200ml

试剂：细胞洗涤液 200ml

试剂B： 200ml

试剂D： 200ml

试剂E： 200ml

说明书 1份

操作方法（操作全过程应在20-25度环境下进行）

1. 取 1ml肝素抗凝血与全血及组织匀浆稀释液（或胎牛血清或人血清悬起匀浆的细胞 1X107/ml）1：1混合后再按2:1的比例与E液混合，20℃-25℃静置3分钟，吸取上层浑浊液，弃去大部分红细胞。在10ml或15ml玻璃离心管中依次小心加入B、D两种液体各1ml,制成梯度界面（液面分层一定清晰）。将吸取的上层浑浊液叠加于D液之液面上，以400g（约1500转/分）离心15分钟（半径15cm水平转子），浑浊液与D液间的界面为NK细胞层.（提取率约为80%）。

2.  吸出NK细胞层以细胞洗涤液洗涤三次备用。细胞放入含细胞洗涤液（Cat#2010X1118）4-5毫升的试管中，充分混匀后，以500g（约1800转/分）离心20分钟。沉淀经反复洗2次即得所需细胞。

分离图例：

注意

TBD 实验室的细胞分离培养基是敏光型的。这种培养基在运输和贮藏过程中应避光保温。由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索*的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。组织，血液，细胞要求新鲜，避免冷冻和冷藏。

贮藏

18-25℃避光保存。启封后置4℃保存。本品为真空包装，未启封前置于10℃以下易出现白色结晶，影响分离效果。

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