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转染各种真核细胞实图及资料

更新时间：2013-01-06      浏览次数：4593

 

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备注：本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验

产品名称 :
 High Efficiency Transfection Reagent
转染各种真核细胞
品牌 :
 BIOMIGA
货号 :
 GT1211-01
规格 :
 0.5mL/1ml/1.5ml/6ml
详细信息 :
 

说明 :

可用于150次6-孔板或3.5mm培养皿的细胞转染。

产品说明

GeneTran是一种新型的脂质体和多聚物混合的转染试剂，可用于各种真核细胞系的质粒转染，如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干细胞和纤维原细胞、间质干细胞、NCCIT、果蝇细胞。同时原代细胞也能转染，如人肿瘤细胞、大鼠肾上腺嗜铬细胞、大鼠和小鼠皮质神经细胞、肝细胞等。对于悬浮细胞也有较高的转染效率和较低的毒性，如HEK 293、小鼠淋巴细胞、昆虫细胞（sf9, sf21, High-Five）。有无血清存在（0-20％）对转染试剂的效果无影响。

主要特点
 
  • 转染各种贴壁细胞。
  • 对胚胎干细胞和原代细胞有较高的转染效率。
  • 对悬浮细胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆虫细胞也有很高的转染效率。在同类产品中具有更高的转染效率和更低的毒性。有无血清存在（0-20％）对转染试剂的效果无影响。
  • 可用于单个质粒或多个质粒共转。
  • 转染24-72小时后，有高的蛋白表达量。
  • 性价比高
  • 操作简便
 
保存条件
 
GeneTran 可在4℃（切勿放-20℃）至少保存12个月。使用之前请先将试剂瞬时离心。
 
质粒转染步骤
 
以下步骤是用于35mm培养皿或6孔培养板转染真核细胞的。若用于其他规格培养皿的转染，请参考表1的用量。所有的数据和体积都是每孔的用量。对于绝大多数的细胞系和原代细胞，质粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。转染HEK293细胞可只按1:1混合。有时优化条件也是必须的（参见质粒DNA转染条件的优化，第5页）。

A. 转染贴壁细胞（35 mm培养皿或6孔培养板）
转染前一天铺板使转染时细胞达到60-70%的汇合度。
1. 对于每一个转染样本，按如下比例配制转染混合液：
2.5 μg    质粒DNA
5 μL       GeneTran
x μL       无血清DMEM（或其他无血清培养基, PBS, DPBS等）
              总体积100 μL
* 不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 用枪头吹打混匀，放置于室温20-40min。
3. 将混合液加入细胞培养皿中，晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
注：血清浓度对于转染效果无影响，经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
4. 在转染后的18-48小时之间，对细胞进行换液。转染18-48小时之后可 检测基因表达。如果检测到蛋白表达，请在转染后4-5天收集培养液。
5. 如果要得到稳定细胞株，请在转染24小时后按1:10传代培养。
 
B. 转染悬浮细胞（35 mm培养皿或6孔培养板）
转染时保证细胞超过90%的密度
1. 对于每一个转染样本，按如下比例配制转染混合液：
2.5 μg    质粒DNA
5 μL       GeneTran
X μL       无血清DMEM（或其他无血清培养基, PBS, DPBS等）
              总体积100 μL
*  不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 用枪头吹打混匀，放置于室温20-40分钟。
3. 将混合液加入细胞培养皿中，晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
    注：血清浓度对于转染效果无影响，经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
4. 在转染后的18-48小时之间，对细胞进行换液。转染18-48小时之后可检测基因表达。如果有蛋白表达，请在转染后4-5天收集培养液。
5. 如果要得到稳定细胞株，请在转染24小时后按1：10传代培养。
表1各种细胞培养板转染推荐用量
 
培养皿/板
表面积（cm2）
培养液（mL）
混合液（μL）
质粒（μg）
GeneTran
10cm
56
10
500
10
20-30 µL
60mm
21
3
150
3
6-9 µL
35mm
8
2
100
2.5
5-7.5 µL
6孔
9.5
2
100
2.5
5-7.5 µL
12孔
3.8
1
50
1
2-3 µL
24孔
1.9
0.5
25
0.5
1-1.5 µL
48孔
0.95
0.25
12.5
0.25
0.5-0.75 µL
96孔
0.32
0.1
5
0.1
0.2-0.3 µL

质粒转染条件优化
前面介绍的转染步骤是针对一般比较好转的细胞。
对于C2C12肌肉细胞系，FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的转染效率不到10%，而GeneTran按照下面的体系转染效率可达70%：
6 μg            质粒DNA
12-18 μL     GeneTran
X μL            无血清DMEM（或其他无血清培养基, PBS, DPBS等）
                   总体积100 μL
 
对于其他细胞系，可参考以下方法优化条件：
A． 在35mm培养板中将质粒量增加到3μg，4μg和6μg。
B． 在35mm培养板中将GeneTran增加到15μL。
C． 如果转染效率较高，但死细胞较多，可降低质粒量到1μg或更低。也可以减少孵育时间到5-24小时。
D． 可按下表优化条件：
问题
DNA
GeneTran
细胞毒性
降到1-2 μg
降到2-3 μL
转染效率低
对于难转的细胞增加到4μg
增加到>1:4
对于特别难转的细胞增加到6μg
增加到>1:4