一步法RT-PCR反转试剂盒简介

更新时间：2013-01-06

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备注：本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验

产品名称 :

一步法RT-PCR反转试剂盒

品牌 :

BIOMIGA

货号 :

RT0213-01

规格 :

20次/50次/100次

详细信息 :

产品简介

一步法RT-PCR试剂盒是为从总RNA或mRNA中特异性的反转和扩增目的RNA而设计的。该系统在一种优化反应体系中共用MMLV反转录酶和热启动Taq DNA聚合酶的预混液，能够检测长达4.0 kb的RNA目的片段。总RNA的用量可从0.01 pg到2 μg之间，该试剂盒为50 μl的反应体系。

试剂盒组分

产品

RT0213-00

RT0213-01

RT0213-02

RT0213-03

Reactions

5

20

50

100

Enzyme mix: MMLV RT/ Hot start Taq Mix

5 μL

20 μL

50 μL

100 μL

2× Reaction mix （optimized bμffer contains dNTP and Mg²⁺）

125 μL

500 μL

1.25 mL

2×1.25 mL

5 mM Magnesiμm Sμlfate

125 μL

500 μL

1.0 mL

2×1.0 mL

dd H₂O

150 μL

600 μL

1.5 mL

2×1.5 mL

保存条件

该试剂盒-20°C保存，在此条件下可保存二年。

产品特点

方便的一管式设置
*的RT-PCR缓冲液及性
高度敏感性、特异性及重复性

推荐RT-PCR反应体系

建议用如下组成配制RT-PCR反应起始液：

组分

50 μl 体系

终浓度

2× Reaction mix

25 μL

1×

Enzyme mix

1.0 μL

Forward Primer （10 μM）

1.0 μL

200 nM

Reverse Primer （10 μM）

1.0 μL

200 nM

RNA template

× μL

Variable （0.01pg - 2μg）

Final Volμme （μL）

50 μL

用dd H₂O补足50 μL体系

*如有必要，镁盐浓度可进一步优化。
1．将反应溶液在冰上解冻。
2．按下列热循环程序进行反应，以便cDNA合成之后立刻进行PCR扩增。
     cDNA合成: 1 cycle: 40–50°C for 10 min
      变性: 1 cycle: 94°C for 2 min
      PCR 扩增: 40 cycles:
                     94°C for 15 s
                     55-65°C for 30 s
                     68°C for 1 min/kb
3．用凝胶电泳检测RT-PCR扩增产物。

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产品	RT0213-00	RT0213-01	RT0213-02	RT0213-03
Reactions	5	20	50	100
Enzyme mix: MMLV RT/ Hot start Taq Mix	5 μL	20 μL	50 μL	100 μL
2× Reaction mix （optimized bμffer contains dNTP and Mg²⁺）	125 μL	500 μL	1.25 mL	2×1.25 mL
5 mM Magnesiμm Sμlfate	125 μL	500 μL	1.0 mL	2×1.0 mL
dd H₂O	150 μL	600 μL	1.5 mL	2×1.5 mL

组分	50 μl 体系	终浓度
2× Reaction mix	25 μL	1×
Enzyme mix	1.0 μL
Forward Primer （10 μM）	1.0 μL	200 nM
Reverse Primer （10 μM）	1.0 μL	200 nM
RNA template	× μL	Variable （0.01pg - 2μg）
Final Volμme （μL）	50 μL	用dd H₂O补足50 μL体系