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96孔板血液gDNA小量提取试剂盒实验细则

更新时间：2013-01-08      浏览次数：1669

 

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备注：本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验

产品名称 :
 96孔板血液gDNA小量提取试剂盒
品牌 :
 BIOMIGA
货号 :
 GD2815-01
规格 :
 4*96/20*96/20*96

详细资料：

图片：

开始之前
 
请阅读完整的手册，以熟悉的EZgene TM 96孔的血液DNA试剂盒过程。
1。准备一个足够的的洗脱缓冲和分装成部分的蛋白酶K原液。存储每个等分试样在-20℃下，在使用前解冻。每个样品，将要求25μL该溶液。
升  GD2815-00溶解洗脱缓冲液2.5毫升
升  GD2815-01与10 mL的洗脱缓冲液溶解
升  GD2815-02溶解50.0毫升洗脱缓冲液
2。如下，储存在室温下用无水乙醇稀释DNA浓缩洗涤缓冲液。
升  GD2815-00加入160毫升（96％-100％）乙醇
升  GD2815-01加入640毫升（96％-100％）乙醇
升  GD2815-02加入乙醇，每瓶640毫升（96％-100％）
3。预热洗脱缓冲液在65℃下
4。调整到250μL的样品的体积。小于250μL的样品，加入适当体积的PBS 250μL。对于大于250μL的样品，每个样品拆分成两个取250μL，并使用1.2 mL圆底孔板溶解的两口井。到96孔DNA板的各孔中装入合并的溶胞产物。
 
储存的血液样本
没有以前的治疗的血液样本的存储导致产量减少的基因组DNA。的结果，血标本应作如下处理，
l对于短期存储（一个星期），在含有EDTA抗凝管收集血液，并储存于4°C。
l对于长期储存，收集管中的血液中含有一种抗凝血剂，并储存在-70°C。解冻冷冻血液样本，在37°C，使用前轻轻搅拌。
 
EZgene TM 96 - 井血液DNA协议
 
1。免除25 μL 蛋白酶K（20 毫克/毫升），每孔1.2 mL圆底孔板的底部。每个样品标记的位置。
2。井的内部，而不接触轮辋与前端部（zui多6 x 10 6淋巴细胞或培养的细胞在PBS中可以通过触摸到圆形孔深孔板的各孔中添加250μL的全 血，血清或体液各孔中使用）。
注：样品体积小于或大于250μL，调整样品体积250μL PBS（开始之前第4页上的详细信息，请参阅“）。
3。每个样品中加入250μL缓冲液BL。避免接触的轮辋井的提示，这可能会导致交叉污染。可选：添加5μL的核糖核酸酶A每口井每250μL 缓冲液BL。添加缓冲BL /核糖核酸酶A组合，以每口井。
4。密封圆形孔板上限（提供）*混合样品，振荡30秒或用力摇动板（边到边）。
注意：摇动机架一侧到另一侧。为了防止可能出现的泄漏周围微管帽，不摇板和失望。
5。在2000 XG短暂离心收集任何样本，帽子。
6。孵育样品在65℃的培养箱中或烤箱10分钟。混合孵化过程中偶尔轻轻地旋转板。
注意：切勿剧烈振荡的样品超过20分钟。
7。在2000年XG短暂离心收集任何解决方案，从帽。取出微管帽。向每孔中加入2 6 0μL 的无水乙醇（96-100％） 。
8。密封圆形孔板使用新上限（提供）。
9。将样品混合，通过涡旋或用力摇动1分钟的板（从一侧到另一侧）。在2000年XG短暂离心收集任何液体的上限。
10。将DNA板顶部的2毫升96孔收集板（提供）。马克的96孔DNA板，以便后面识别。
11。传输从步骤10到96孔DNA板的各孔中的所有样品。
12。用密封膜密封的96孔DNA板。离心在5000 XG 5-10分钟。确保所有的样品已通过膜的DNA板的各孔中。
13。丢弃流过的96孔收集板。删除的粘合膜的盖子，然后在各孔中添加400μL缓冲液KB。
14。密封板与新的密封膜，并在5000×g离心5分钟，然后离心处理，以使板。丢弃流过的96孔收集板。
15。取出的密封膜的盖子，然后在各孔中添加700μLDNA洗涤缓冲液。
注：即DNA洗涤缓冲液浓缩物和被提供作为瓶或第4页上所示，必须用无水乙醇稀释。如果是冷藏保存，稀释的洗涤缓冲液必须冷却至室温后再使用。
16。密封板与新的密封膜，并在3000-5000 xg离心5分钟，然后离心处理，以使板。丢弃的流量，通过在96孔收集板。
17。卸下粘接膜盖和在各孔中添加600μLDNA洗涤缓冲液。将DNA的2毫升收集板的顶部板96孔，96孔DNA板密封与 ​​一个新的密封膜和离心机在马克西速度（5,000 xg离心）10分钟。
18。取出的密封膜，并在真空烘箱中或在70℃的培养箱预置为8分钟，干燥膜孵育96孔DNA板。
注意：这些干燥步骤用于除去的微量乙醇，否则可能会干扰与下游应用是至关重要的。
19。将96孔DNA板之上的新的安装机架的微管（附带）。添加200μL洗脱缓冲液在65℃下预热96孔DNA板的各孔中。两到四分钟，在室温下孵育，或在孵化器设定在65℃的一到两分钟。
20。与一个新的密封膜密封96孔DNA板和离心处理，以使板在5,000 xg离心5分钟，以洗脱DNA。
注： *次洗脱通常会产生60％-70％的DNA绑定到列。另外200μL洗脱缓冲液可以产生另外的20％。 低于50μL的卷，大大降低了产量。