组织单细胞悬液的制备方法

组织单细胞悬液的制备方法

注：A.组织匀浆液需现用现配，配制方法为：20%标准胎牛血清（产品编号：TBD31HB）

      与 80%F 液（产品编号：F2013TBD）混匀，备用。

   B．本试剂盒中不包含胶原酶，若采用酶消化法制备单细胞悬液，请用户根据各实验室要求另购不同类型胶原酶。

1.剪碎法：

（1） 将组织块放入平皿后，加入少量组织匀浆液；用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入 5ml

      组织匀浆液。

（2） 用吸管吸取组织匀浆，用 200 目不锈钢滤网(另购)过滤到离心管内。

（3） 沉淀以 450-500g 离心 15 分钟，弃上清。

（4） 用含 80%标准胎牛血清（产品编号：TBD31HB）的样本稀释液（产品编号：2010C1119），       悬浮沉淀成细胞浓度为 2×10⁸–1×10⁹/ml 的单细胞悬液备用。

2.匀浆器法：

（1） 用眼科剪将组织剪成小块；放入 70ml 组织研磨器内，加入 2ml 组织匀浆液；缓慢转动研         棒，研磨至匀浆。

（2） 用 5ml 组织匀浆液冲洗研器；收集细胞悬液，经 200 目不锈钢滤网（另购）过滤到离心管         内。

（3） 沉淀以 450-500g 离心 15 分钟，弃上清。

（4） 用含 80% 标准胎牛血清（产品编号： TBD31HB ）的样本稀释液（产品编                 号：2010C1119），悬浮沉淀成细胞浓度为 2×10⁸–1×10⁹/ml 的单细胞悬液备用。

3.酶消化法：

（1） 用 F 液（产品编号：F2013TBD）将胶原酶稀释，终浓度为 400U/ml，至于冰浴备用。

（2） 取一适当大小培养皿进行操作：用镊子夹碎动物脾脏，加入稀释后的胶原酶，37℃

      消化 20 分钟。

（3） 以 200 目不锈钢滤网（另购）过滤到离心管内。

（4） 沉淀以 450-500g 离心 15 分钟，弃上清。

（5） 用含 80% 标准胎牛血清（产品编号： TBD31HB ）的样本稀释液（产品编                 号：2010C1119），悬浮沉淀成细胞浓度为 2×10⁸–1×10⁹/ml 的单细胞悬液备用。