细胞分离液的实验标准
所需材料(不提供)
1、实验室用蒸馏水或去离子水
2、100ml量筒
3、用于萃取样品及收集萃取液玻璃器皿
4、滤纸,Whatman NO.4及相当者
5、可以吸取500ul溶液的吸管及一次性吸头
6、吸水纸
7、450nm的酶标仪
8、计时器
样品的准备
1、粉碎好的样品过20目筛并与先前取样*混合,不立即使用分析的样品应放在冰箱中储存
2、称取20g样品,量取100ml水到一有盖容器中,所用的容器使用前应是封闭良好的
3、剧烈震荡3分钟
4、静置2-3分钟,使样品沉淀
5、用Whatman1#玻璃纤维滤纸过滤15ml萃取液,收集滤液到一干净容器中
清洗液的准备
1、将清洗浓缩倒入1L溶积的容器中,加入实验室用蒸馏水。
2、将配好的清洗液转移至洗瓶中
检测程序(注意标准及样品做重复,可以提高检测的准确度及度)
1、开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温
2、取适量的测试管固定在测试管架上,确定末使细胞分离液用的测试管,与干燥剂一同放入密封袋中保存。
3、加入500ul的样品及标准品到相应的测试管中,注意使用一次性吸头止交叉污染
4、加入500ul的酶标记物到测试管中
5、室温下孵育10分钟
6、倒掉微孔中溶液,测试孔中注满清洗液,然后到掉,重复4次,共五次洗板
7、zui后一次清洗完后,倒掉孔中溶液,然后翻转测试孔板在吸水纸上拍干
8、每个测试fermentas管中加入500ul的底物溶液
9、室温下孵育5分钟
10、每个测试管中加入500ul停止液
11、450nm读吸光度值
结果判断
1、半定时结果的判定,可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定,样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值,则说明样品的
DON含量大于此标准的NON浓度,样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值,则说明样品的DON含量小于此标准的DON浓度
2、定量结果判定,需要以标准的吸光度值为X轴,标准浓度的半对数为Y轴给制曲线图,将标准浓度抗体及吸光度值的点用直线连接,根
据样品的吸光度值在Y轴上即可找到相应样品的浓度,如果样品的吸光度值大于zui大标准的吸光度值或小于zui小样品的吸光度值,即
可说明此样品中DON的含量大于6ppm或小于0.5ppm。另外,也可应用Beacon公司提供的Excel软件来计算