台盼蓝(Trypan Blue)的作用机理:
正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝(Trypan Blue),使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝(Trypan Blue)染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。因此,借助台盼蓝(Trypan Blue)染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝(Trypan Blue)是组织和细胞培养中zui常用的死细胞鉴定染色方法之一。
台盼蓝(Trypan Blue)染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较的定量。
台盼蓝(Trypan Blue)染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。
台盼蓝(Trypan Blue)配置和染色步骤:
1、4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。
2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。
3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。(终浓度0.04%)
4、计数:在三分钟内,分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%