| 5~10 mL 细菌培养液中纯化提取30~70ug高纯度质粒DNA。 试剂盒组分 | Catalog# | PD1213-01 | | Preps | 50 | | ezBind Columns | 50 | | Buffer A1 | 25 mL | | Buffer B1 | 25 mL | | Buffer N1 | 30 mL | | Buffer KB | 30 mL | | DNA Wash Buffer* | 15 mL | | Elution Buffer | 15 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 2.5 mg （125 µL） | | User Manual | 1 | 保存条件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。 注意事项： - 使用前请将适量乙醇加入DNA Wash Buffer，令乙醇终浓度为80%
- 纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer和Elution Buffer
- 若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
- 若用于提取1-4 mL的菌落，请将Buffer A1, B1, N1的量降低至250 µL, 250 µL 及 350 µL，DNA wash Buffer及Elution Buffer的量不变。
操作步骤： - 接种新鲜的单个菌落到5-12 mL的LB培养基（含适量抗生素），37oC震荡培养14-16小时（勿超过16小时）。室温下10,000 rpm离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
- 加入450 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
- 加入 450 µL Buffer B1, 轻轻地反转多次至溶液充分混匀，室温静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
- 加入550 µL Buffer N1, 立即反转多次，至溶液充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
- 将离心管转至高速离心机，在室温下13,000 rpm离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。
- 小心吸取700 µL离心后的上清液至带有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室温下13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“7”至全部上清离心过DNA柱。
- 可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
- 向离心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer（确保已加入无水乙醇），室温下，13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“8”。
- 将离心柱放回高速离心机中，13,000 rpm室温下开盖离心2分钟，以*去除残留的乙醇。
- 将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中，向DNA柱的正中间加入100~150 µL（体积>100 µL）的ddH2O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置2分钟，13,000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA。将洗脱液再加到柱的中间，13,000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA。
操作流程：  |
更新时间：2013-01-06 
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