| 50~100 mL 细菌培养液中纯化400 μg高纯度质粒DNA 试剂盒组分： | Catalog # | PD1412-02 | | Preps | 25 | | ezBindTM Columns | 25 | | Buffer A1 | 135 mL | | Buffer B1 | 135 mL | | Buffer C1 | 170 mL | | Buffer KB | 110 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 13.5 mg（675 µL） | | Elution Buffer | 60 mL | | User Manual | 1 | 保存条件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。 注意事项： - 质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同体积的Wash Buffer （70% 乙醇）和Elution Buffer.
- 转化菌：若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
- 柱结合能力：450 μg
操作简明步骤： - 取100 µL新鲜的菌液接种到15-80 mL （勿超过 100 mL）的LB培养基（含适量抗生素），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
- 加入5 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
- 加入5 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
- 加入6 mL Buffer C1, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
- 将离心管转至高速离心机，在室温下14,000 x g 离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。
- 小心吸取离心后的上清液至50 mL管中（避免吸起沉淀），加入6 mL 100% 乙醇，立即摇匀，需马上离心过DNA柱。
- 立即转移6.0 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下> 2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。
- 可选: 向DNA柱中加入4.0 mL Buffer KB, 室温下> 2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
- 向离心柱中加入5.0 mL 70% 乙醇，室温下>2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
- 将离心柱放回高速离心机中，室温下>2,500 x g 开盖离心10分钟，以*去除残留的乙醇。
- 将离心柱转至一个新的15 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5-1 mL灭菌ddH2O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置1分钟，>2,500 x g离心5分钟，以洗脱质粒DNA。若想提高得率，将15 mL离心管中的洗脱液再加到柱的中间，>2,500 x g离心5分钟以洗脱质粒DNA。
操作流程：  |
更新时间：2013-01-05 
浏览次数：1064
我的位置：