琼脂糖凝胶DNA /PCR产物大量回收试剂盒 步骤说明

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备注：本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验

英文名称：DNA Gel/PCR Purification Maxiprep kit  

中文名称 :琼脂糖凝胶DNA /PCR产物大量回收试剂盒

编号： DC3531-01

规格: 10次

品牌：biomiga

胶回收/PCR产物纯化简明步骤（DC3531）

使用前请注意：

l          使用前请分别在DNA Wash Buffer中加入8 mL （DC3531-00） 或者60 mL（DC3531 -01） 或者96 mL （DC3531-02） 或者60 mL （DC3531-03） 100% 乙醇。

l          溶解100 mg的琼脂糖凝胶，约需要100 µL Buffer GC。

l          溶胶液GC 在较低温度下易沉淀，若温度较低，出现沉淀，使用前请在37 ^oC加热几分钟，至沉淀溶解后再使用。

l          本试剂盒吸附柱吸附能力为80µg，所有操作步骤均在室温下进行。

用户自备材料:

R   100% 乙醇

R   台面离心机和1.5 mL 微型离心管

R   55-60 ^oC 水浴（胶回收时用）

R   真空装置（真空步骤时用）

R   小于200 bp的片段的可加异丙醇。

PCR产物纯化/胶回收离心法操作步骤：

1.        PCR产物纯化：在1倍体积的PCR反应物中加入2倍体积的 Buffer GC，涡旋充分混匀。对小于200 bp的PCR产物，加入5倍体积的Buffer GC。

  胶回收：将含DNA的琼脂糖凝胶切下，转至1.5 mL离心管中，再加入1倍体积的Buffer GC （100 mg的凝胶加入100 µL Buffer GC）。在55-60 ^oC下培育8分钟左右，且每隔2分种轻弹试管底部，直至胶溶解*，放置使其冷却至室温。

建议: 

R   为取得的实验结果，请使用新鲜配制的电泳缓冲液制胶和电泳。

R   切胶时，尽量缩短在紫外灯下照射的时间，以减少紫外对DNA的损伤，并尽量切除不含DNA的凝胶。

R   若DNA片段小于200 bp，请加入1体积的异丙醇。

2.        转移700 µL DNA/Buffer GC 混合溶液至离心柱中，室温下，13,000 x g下离心1分种，弃废液，将离心柱放回收集管中。重复此步使剩余的溶液通过柱子。

3.        加入300 µL of Buffer GC到离心柱中，室温下13,000 x g离心30-60 秒，弃废液。

4.        加入650 µL DNA Wash Buffer （确保已将乙醇按说明书要求加入DNA Wash Buffer中），室温下在13,000 x g下离心30秒，弃废液。重复步骤4。

4.        13,000 x g开盖再次离心3分钟，以去除柱中残余的乙醇。

注意：此步操作对DNA的产率多少极为关键。

5.        将柱子放入干净的1.5 mL试管中，向柱中加入在60^oC 下预热的50-100 µL （>50 µL） Elution Buffer或ddH₂O。在室温下放置1分钟。13,000 x g 离心1分种以洗脱DNA。将洗脱液重新上柱，再次离心洗脱。

建议: 将洗脱缓冲液预热到65 ^oC，加洗脱液后将柱子整个温育5分钟后再离心洗脱可以增加DNA回收效率。

对大于8kb的片段，加洗脱液后将柱子整个温育15-30分钟可以提高回收效率。

PCR产物纯化/胶回收真空/离心法操作步骤

1.       将含DNA的琼脂糖凝胶切下，转至1.5 mL离心管中，再加入1倍体积的Buffer GC（100 mg的凝胶加入100 µL Buffer GC）。在55-60^oC下培育8分钟左右，且每隔2分种轻弹试管底部，直至胶溶解*，放置使其冷却至室温。

2.        准备真空装置，将柱子与歧管连接。

3.        将 DNA/Buffer GC 混合溶液转移至离心柱。

4.        打开真空装置，溶液流下。

5.        加入650 µL的DNA Wash Buffer漂洗离心柱。

6.        重复步骤5。再真空抽2分种。

7.        将柱子放入收集管，开盖在zui高速离心2分种以除去乙醇。

将柱子放入干净的1.5 mL试管中，向柱中加入50-100 µL （>50 µL）Elution Buffer或ddH₂O。在室温下放置1分种。13,000 x g 离心1分种以洗脱DNA。