质粒小抽详细参数

更新时间：2013-03-27

浏览次数：1996

订货咨询：；；；

在线：1656711470 865512910 1730443944

备注：本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验

产品名称 :

质粒小量提取试剂盒

品牌 :

biomiga

货号 :

PD1211-01

规格 :

50次

详细信息 :

从1~5mL 细菌培养液中纯化提取10~30 ug 高纯度质粒DNA。

试剂盒组分：

Catalog#

PD1211-01

Preps

50

ezBind Columns

50

Buffer A1

15 mL

Buffer B1

15 mL

Buffer N1

20 mL

Buffer KB

30 mL

DNA Wash Buffer*

15 mL

Elution Buffer

10 mL

RNase A （20 mg/mL）

1.5 mg（75 µL）

User Manual

1

保存条件：

RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。

注意事项：

使用前请将适量乙醇加入DNA Wash Buffer，令乙醇终浓度为80%

纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer和Elution Buffer

若为-70^oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。

操作简要步骤：

接种新鲜的单个菌落到1-4 mL的LB培养基（含适量抗生素），37^oC震荡培养14-16小时。室温下10,000 x g离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。

加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。

加入 250 µL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。

加入350 µL Buffer N1, 立即反转多次，至溶液充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。

室温下13,000 rpm离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。

小心吸取离心后的上清液至带有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室温下13,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。

可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。

向离心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer（确保已加入无水乙醇），室温下，13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“8”。

将离心柱放回高速离心机中，13,000 rpm室温下开盖离心2分钟，以*去除残留的乙醇。

将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中，向DNA柱的正中间加入50~100 µL（体积>50 µL）的ddH₂O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置2分钟，13,000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA。将洗脱液再加入到柱中，在13,000 rpm 离心1分钟，收集洗脱液。

操作流程：

Catalog#	PD1211-01
Preps	50
ezBind Columns	50
Buffer A1	15 mL
Buffer B1	15 mL
Buffer N1	20 mL
Buffer KB	30 mL
DNA Wash Buffer*	15 mL
Elution Buffer	10 mL
RNase A （20 mg/mL）	1.5 mg（75 µL）
User Manual	1