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高效转染各种真核细胞1.5ml

GeneTran是一种新型的脂质体和多聚物混合的转染试剂,可用于各种真核细胞系的质粒转染,如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干细胞和纤维原细胞、间质干细胞、NCCIT、果蝇细胞。同时原代细胞也能转染,如人肿瘤细胞、大鼠肾上腺嗜铬细胞、大鼠和小鼠皮质神经细胞、肝细胞等。
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产品介绍

 

高效转染各种真核细胞实图及资料

点击次数:14 发布时间:2013-1-6

 

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备注:本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验


产品名称 :

 High Efficiency Transfection Reagent

高效转染各种真核细胞

品牌 :

 BIOMIGA

货号 :

 GT1211-01

规格 :

 0.5mL/1ml/1.5ml/6ml

详细信息 :

 

说明 :

可用于150次6-孔板或3.5mm培养皿的细胞转染。

产品说明

GeneTran是一种新型的脂质体和多聚物混合的转染试剂,可用于各种真核细胞系的质粒转染,如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干细胞和纤维原细胞、间质干细胞、NCCIT、果蝇细胞。同时原代细胞也能转染,如人肿瘤细胞、大鼠肾上腺嗜铬细胞、大鼠和小鼠皮质神经细胞、肝细胞等。对于悬浮细胞也有较高的转染效率和较低的毒性,如HEK 293、小鼠淋巴细胞、昆虫细胞(sf9, sf21, High-Five)。有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响。

主要特点

 

  • 高效转染各种贴壁细胞。
  • 对胚胎干细胞和原代细胞有较高的转染效率。
  • 对悬浮细胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆虫细胞也有很高的转染效率。在同类产品中具有更高的转染效率和更低的毒性。有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响。
  • 可用于单个质粒或多个质粒共转。
  • 转染24-72小时后,有高的蛋白表达量。
  • 性价比高
  • 操作简便

 

保存条件

 

GeneTran 可在4℃(切勿放-20℃)至少保存12个月。使用之前请先将试剂瞬时离心。

 

质粒转染步骤

 

以下步骤是用于35mm培养皿或6孔培养板转染真核细胞的。若用于其他规格培养皿的转染,请参考表1的用量。所有的数据和体积都是每孔的用量。对于绝大多数的细胞系和原代细胞,质粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。转染HEK293细胞可只按1:1混合。有时优化条件也是必须的(参见质粒DNA转染条件的优化,第5页)。

 

A. 转染贴壁细胞(35 mm培养皿或6孔培养板)

转染前一天铺板使转染时细胞达到60-70%的汇合度。

1. 对于每一个转染样本,按如下比例配制转染混合液:

2.5 μg    质粒DNA

5 μL       GeneTran

x μL       无血清DMEM(或其他无血清培养基, PBS, DPBS等)

              总体积100 μL

* 不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清

2. 用枪头吹打混匀,放置于室温20-40min。

3. 将混合液加入细胞培养皿中,晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。

注:血清浓度对于转染效果无影响,经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。

4. 在转染后的18-48小时之间,对细胞进行换液。转染18-48小时之后可 检测基因表达。如果检测到蛋白表达,请在转染后4-5天收集培养液。

5. 如果要得到稳定细胞株,请在转染24小时后按1:10传代培养。

 

B. 转染悬浮细胞(35 mm培养皿或6孔培养板)

转染时保证细胞超过90%的密度

1. 对于每一个转染样本,按如下比例配制转染混合液:

2.5 μg    质粒DNA

5 μL       GeneTran

X μL       无血清DMEM(或其他无血清培养基, PBS, DPBS等)

              总体积100 μL

*  不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清

2. 用枪头吹打混匀,放置于室温20-40分钟。

3. 将混合液加入细胞培养皿中,晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。

    注:血清浓度对于转染效果无影响,经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。

4. 在转染后的18-48小时之间,对细胞进行换液。转染18-48小时之后可检测基因表达。如果有蛋白表达,请在转染后4-5天收集培养液。

5. 如果要得到稳定细胞株,请在转染24小时后按1:10传代培养。
 

表1各种细胞培养板转染推荐用量

 

培养皿/板

表面积(cm2

培养液(mL)

混合液(μL)

质粒(μg)

GeneTran

10cm

56

10

500

10

20-30 µL

60mm

21

3

150

3

6-9 µL

35mm

8

2

100

2.5

5-7.5 µL

6孔

9.5

2

100

2.5

5-7.5 µL

12孔

3.8

1

50

1

2-3 µL

24孔

1.9

0.5

25

0.5

1-1.5 µL

48孔

0.95

0.25

12.5

0.25

0.5-0.75 µL

96孔

0.32

0.1

5

0.1

0.2-0.3 µL


质粒转染条件优化

前面介绍的转染步骤是针对一般比较好转的细胞。

对于C2C12肌肉细胞系,FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的转染效率不到10%,而GeneTran按照下面的体系转染效率可达70%:

6 μg            质粒DNA

12-18 μL     GeneTran

X μL            无血清DMEM(或其他无血清培养基, PBS, DPBS等)

                   总体积100 μL

 

对于其他细胞系,可参考以下方法优化条件:

A. 在35mm培养板中将质粒量增加到3μg,4μg和6μg。

B. 在35mm培养板中将GeneTran增加到15μL。

C. 如果转染效率较高,但死细胞较多,可降低质粒量到1μg或更低。也可以减少孵育时间到5-24小时。

D. 可按下表优化条件:

问题

DNA

GeneTran

细胞毒性

降到1-2 μg

降到2-3 μL

转染效率低

对于难转的细胞增加到4μg

增加到>1:4

对于特别难转的细胞增加到6μg

增加到>1:4



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