高效转染各种真核细胞1.5ml
- 型号: GT1211-03
- 更新时间: 2024-06-02
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高效转染各种真核细胞实图及资料
点击次数:14 发布时间:2013-1-6
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备注:本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验
产品名称 :
High Efficiency Transfection Reagent
高效转染各种真核细胞
品牌 :
BIOMIGA
货号 :
GT1211-01
规格 :
0.5mL/1ml/1.5ml/6ml
详细信息 :
说明 : | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
可用于150次6-孔板或3.5mm培养皿的细胞转染。 GeneTran是一种新型的脂质体和多聚物混合的转染试剂,可用于各种真核细胞系的质粒转染,如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干细胞和纤维原细胞、间质干细胞、NCCIT、果蝇细胞。同时原代细胞也能转染,如人肿瘤细胞、大鼠肾上腺嗜铬细胞、大鼠和小鼠皮质神经细胞、肝细胞等。对于悬浮细胞也有较高的转染效率和较低的毒性,如HEK 293、小鼠淋巴细胞、昆虫细胞(sf9, sf21, High-Five)。有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响。 主要特点
保存条件
GeneTran 可在4℃(切勿放-20℃)至少保存12个月。使用之前请先将试剂瞬时离心。
质粒转染步骤
以下步骤是用于35mm培养皿或6孔培养板转染真核细胞的。若用于其他规格培养皿的转染,请参考表1的用量。所有的数据和体积都是每孔的用量。对于绝大多数的细胞系和原代细胞,质粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。转染HEK293细胞可只按1:1混合。有时优化条件也是必须的(参见质粒DNA转染条件的优化,第5页)。 A. 转染贴壁细胞(35 mm培养皿或6孔培养板) 转染前一天铺板使转染时细胞达到60-70%的汇合度。 1. 对于每一个转染样本,按如下比例配制转染混合液:
* 不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清 2. 用枪头吹打混匀,放置于室温20-40min。 3. 将混合液加入细胞培养皿中,晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。 注:血清浓度对于转染效果无影响,经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。 4. 在转染后的18-48小时之间,对细胞进行换液。转染18-48小时之后可 检测基因表达。如果检测到蛋白表达,请在转染后4-5天收集培养液。 5. 如果要得到稳定细胞株,请在转染24小时后按1:10传代培养。
B. 转染悬浮细胞(35 mm培养皿或6孔培养板) 转染时保证细胞超过90%的密度 1. 对于每一个转染样本,按如下比例配制转染混合液:
* 不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清 2. 用枪头吹打混匀,放置于室温20-40分钟。 3. 将混合液加入细胞培养皿中,晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。 注:血清浓度对于转染效果无影响,经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。 4. 在转染后的18-48小时之间,对细胞进行换液。转染18-48小时之后可检测基因表达。如果有蛋白表达,请在转染后4-5天收集培养液。 5. 如果要得到稳定细胞株,请在转染24小时后按1:10传代培养。表1各种细胞培养板转染推荐用量
前面介绍的转染步骤是针对一般比较好转的细胞。 对于C2C12肌肉细胞系,FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的转染效率不到10%,而GeneTran按照下面的体系转染效率可达70%:
对于其他细胞系,可参考以下方法优化条件: A. 在35mm培养板中将质粒量增加到3μg,4μg和6μg。 B. 在35mm培养板中将GeneTran增加到15μL。 C. 如果转染效率较高,但死细胞较多,可降低质粒量到1μg或更低。也可以减少孵育时间到5-24小时。 D. 可按下表优化条件:
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