高效转染各种真核细胞/1.5ml
- 型号： GT1212-03
- 更新时间： 2024-06-02
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备注：本公司销售的所有产品仅用于生化科研试验
产品名称 :
Transfection Reagent for Transient Protein Expression
蛋白表达增强型转染试剂
品牌 :
BIOMIGA
货号 :
GT1212-01
规格 :
0.5mL/1.0mL/1.5mL/6.0mL
详细信息 :
说明 : | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 可用于150次6-孔板或3.5mm培养皿的细胞转染。 产品说明
GeneTran II是一种新型的脂质体和多聚物转染试剂，可用于各种真核细胞系的质粒转染，如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干细胞和纤维原细胞、间质干细胞、NCCIT、果蝇细胞。同时原代细胞也能转染，如人肿瘤细胞、大鼠肾上腺嗜铬细胞、大鼠和小鼠皮质神经细胞、肝细胞等。对于悬浮细胞也有较高的转染效率和较低的毒性，如HEK 293、小鼠淋巴细胞、昆虫细胞（sf9, sf21, High-Five）。有无血清存在（0-20％）对转染试剂的效果无影响。
主要特点
高效转染各种贴壁细胞。 对胚胎干细胞和原代细胞有较高的转染效率。 对悬浮细胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆虫细胞也有很高的转染效率。 在同类产品中具有更高的转染效率和更低的毒性。 有无血清存在（0-20％）对转染试剂的效果无影响。 可用于单个质粒或多个质粒共转。 转染24-72小时后，有高的蛋白表达量。 性价比高 操作简便
保存条件
GeneTran 可在4℃（切勿放-20℃）至少保存18个月。使用之前请先将试剂瞬时离心。
质粒转染步骤
以下步骤是用于35mm培养皿或6孔培养板转染真核细胞的。若用于其他规格培养皿的转染，请参考表1的用量。所有的数据和体积都是每孔的用量。对于绝大多数的细胞系和原代细胞，质粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。转染HEK293细胞可只按1:1混合。有时优化条件也是必须的（参见质粒DNA转染条件的优化，第7页）。
A. 转染贴壁细胞（35 mm培养皿或6孔培养板） 转染前一天铺板使转染时细胞达到60-70%的汇合度。 1. 对于每一个转染样本，按如下比例配制转染混合液：
* 不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清 2. 用枪头吹打混匀，放置于室温20-40min。
3. 将混合液加入1 μL Reagent B，混匀后，加入到细胞培养皿中，晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
注：血清浓度对于转染效果无影响，经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
4. 在转染后的18-48小时之间，对细胞进行换液。转染18-48小时之后可 检测基因表达。如果检测到蛋白表达，请在转染后4-5天收集培养液。
5. 如果要得到稳定细胞株，请在转染24小时后按1:10传代培养。
B. 转染悬浮细胞（35 mm培养皿或6孔培养板） 转染时保证细胞超过90%的密度 1. 对于每一个转染样本，按如下比例配制转染混合液：
* 不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 枪头吹打混匀，放置于室温20-40分钟。
3. 将混合液加入1 μL Reagent B，混匀后，加入到细胞培养皿中，晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
注：血清浓度对于转染效果无影响，经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
4. 在转染后的18-48小时之间，对细胞进行换液。转染18-48小时之后可检测基因表达。如果有蛋白表达，请在转染后4-5天收集培养液。
5. 如果要得到稳定细胞株，请在转染24小时后按1：10传代培养
表1各种细胞培养板转染推荐用量
质粒转染条件优化
前面介绍的转染步骤是针对一般比较好转的细胞。 对于C2C12肌肉细胞系，FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的转染效率不到10%，而GeneTran按照下面的体系转染效率可达70%：
对于其他细胞系，可参考以下方法优化条件： A． 在35mm培养板中将质粒量增加到3μg，4μg和6μg。 B． 在35mm培养板中将GeneTran增加到15μL。 C． 如果转染效率较高，但死细胞较多，可降低质粒量到1μg或更低。也可以减少孵育时间到5-24小时。 D． 可按下表优化条件：
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