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台盼蓝的染色机理和应用方法

更新时间:2010-01-15      4081
台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。

用品:
1. 4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。
2. 吸管、血细胞计数板、显微镜

步骤:
1、制备单细胞悬液。并作适当稀释(10 *6 细胞/ml)
2、染色:取9mL细胞悬液移入试管中,加1mL0.4%台盼蓝溶液,混匀。
3、观察

注意事项:台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。

台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况,用0.4%台盼蓝直接染色,在显微镜下观察即可,活细胞不被染色。方便易用,因此在实验室中比较常用,尤其在心肌细胞原代培养中。

台盼兰染色法价格低廉,操作简单,又不用无菌操作,做这个实验只要是把显微镜调好了,细胞浓度调好了就不会有问题,是一个养细胞的入门实验,所以很适合初学者做。我做这个实验主要是用来确定抑制细胞增殖的药物浓度,排除浓度过大引起的毒性反应
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